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- 想把PEI轉(zhuǎn)染試劑使用好，它的操作流程你必須清楚
- 點(diǎn)擊次數(shù)：4118 更新時(shí)間：2022-02-24
- PEI轉(zhuǎn)染試劑是通過(guò)納米技術(shù)合成，通過(guò)物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護(hù)核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時(shí)增強(qiáng)核酸進(jìn)入細(xì)胞核中表達(dá)。不含任何動(dòng)物來(lái)源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動(dòng)物和器官組織的功能，可以多次在同一動(dòng)物注射。PEI轉(zhuǎn)染試劑的分類：第1代陽(yáng)離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑，系聚乙二胺類轉(zhuǎn)染試劑，占到市場(chǎng)上90%以上，十分適合于一般實(shí)驗(yàn)。但用于新藥研究，三期臨床有風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)榧?xì)胞毒性大。第2代陽(yáng)離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑，系聚alpha賴氨酸組氨酸類轉(zhuǎn)染試劑，大大降低了細(xì)胞毒性。第3代陽(yáng)離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑，系聚epsilon賴氨酸組氨酸類轉(zhuǎn)染試劑，基本消除了細(xì)胞毒性。國(guó)內(nèi)已有生產(chǎn)。PEI轉(zhuǎn)染試劑的操作流程：1、細(xì)胞鋪板：提前一天將細(xì)胞種植在六孔板中，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在70%~80%為宜。2、轉(zhuǎn)染過(guò)程：?、?、在轉(zhuǎn)染前2h，移除細(xì)胞上原有的培養(yǎng)基，換為新鮮的*培養(yǎng)基。?、?、將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無(wú)血清稀釋液稀釋，充分混勻制成DNA稀釋液。?、?、向DNA稀釋液中直接加入4uL轉(zhuǎn)染試劑，室溫靜置10~15min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制完成。?、?、將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕柔混勻。⑤、繼續(xù)培養(yǎng)24~48h，收取細(xì)胞進(jìn)行鑒定或加入相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定克隆。?、蕖⑹褂帽井a(chǎn)品轉(zhuǎn)染后一般在24h開(kāi)始進(jìn)入表達(dá)高峰期，36~48h達(dá)到表達(dá)高峰，相對(duì)于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劉，達(dá)到峰值的時(shí)間延后約6~12h。
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